二抗是在異宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體,上面通常連有酶、熒光素或生物素等偶聯標記。二抗能對某一特定物種(如小鼠)的所有抗體(如IgG、IgM 或IgA 等)均產生反應,因而使用標記的二抗可以免去對每個一抗進行標記,大大節省了時間和費用;此外,一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子,從而使信號大大增強,提高了實驗靈敏度。
另外,免疫學試驗中常通過封閉試劑來封閉未吸附蛋白的固相載體部位,以減少非特異性結合背景的影響。比如ELISA 試驗中繼包被之后用0.05-0.5% BSA 等溶液來占據未能被包被的空隙;又如WB 試驗中常用5% 脫脂奶粉或者BSA 封閉膜上除轉印蛋白占據的其它部位。除了用于封閉未吸附蛋白的固相載體,封閉試劑也被廣泛用于封閉其它非特異性結合。如ELISA 實驗中,特異性抗體與血清樣本中IgM、IgG 型類風濕因子以及補體等組分產生非特異性結合;IHC、IF 等試驗中,特異性抗體與樣本中Fc 受體的結合,以及在IHC 和IF 雙染或三染實驗中,驢血清也被廣泛用于封閉試劑以減少抗體之間的非特異性結合;另外,Fab 片段單鏈二抗也被用于熒光雙染中的有效封閉。
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特色熱銷二抗產品(Alexa Fluor&Dylight熒光二抗的新穎之處);
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免疫學問題之二抗解決方案(ELISA、WB、IHC、IF、IP及FC等)
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