1.將 E.coli /phage lysate 以 1:10-20 稀釋在 TBST 溶液中。
2.將 4 張 82mm 的 nitrocellulose membranes（NC）浸入稀釋后的 E.coli/ phage
lysate 中，室溫下水平搖動 30 分鐘，取出 NC 并使膜瀝干。
3.用 50ml TBST 溶液洗膜 3 次，每次 10 分鐘。

血清制備
1.取血后，37oC 下，讓血液凝固 1 到 2 小時（不加抗凝劑）；
2.4oC 冰箱過夜（讓血塊固縮）；
3.當血清自然析出后， 4oC，3000 轉/分，離心 10 分鐘，分離血清，棄去

第一次免疫用完全佐劑與免疫原混合，以后加強免疫用不完全佐劑與免疫原
混合，采取多點，時間間隔式免疫法

將 15-20cm 長的新生兒臍帶放入無菌的 PBS 溶液中儲存。（注：4℃下最多貯存 24 小時，室溫下不超過 6 小時，否則廢棄）

將對數生長的腫瘤細胞收集, 用無血清基質 10.0ml, 于 1500 轉/分, 離心3min, 連續洗 3 次, 最后用無血清基質混勻, 用血球計數器計算腫瘤細胞數量(平均 5 個中方格的細胞計數×1000444即是腫瘤數/毫升)

細胞復蘇與培養

確定抗生素作用的最佳濃度

該操作以 Invitrogen 公司的脂質體轉染試劑 LipofectAMINE 為例，其它轉染試劑可參照各自的使用說明書進行。

重組子可通過酶切進行鑒定，也可以利用擴增引物通過 PCR 進行鑒定，陽性重組子能切出所需要的片段或得到相應片段的 PCR 產物

取 100ul感受態細胞于冰浴上融化

挑取適當菌株的 E.coli 單菌落接種于 2ml SOB 培養液中，37℃搖床過夜

連接前先電泳確定待連接載體與片段的濃度