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                  總RNA的提?。?Trizol 法提取 )

                  發布者:艾美捷科技    發布時間:2021-06-08     
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                  在收集到生物材料之后,最好能即刻進行 RNA 制備工作。若需暫時儲存,則應以液氮將生物材料急速冷凍后,儲存于-80℃冷凍柜。在制備 RNA 時,將儲存于冷凍柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破細胞,不可以先行解凍 ,以避免 RNase 的作用。


                  1.提取組織 RNA 時,每50~100mg 組織用 1ml Trizol 試劑對組織進行裂解;提取細胞 RNA 時,先離心沉淀細胞,每 5-10 ╳106 個細胞加 1ml Trizol 后,反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞;


                         2.將上述組織或細胞的Trizol 裂解液轉入EP管中,在室溫15~30C下放置 5 分鐘 ;


                  3. 在上述 EP 管中,按照每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿的量加入氯仿,蓋上 EP管蓋子,在手中用力震蕩 15 秒,在室溫下(15℃~30℃)放置 2~3 分鐘后,
                  12000g(2℃~8℃)離心 15 分鐘;


                  4. 取上層水相置于新 EP管中,按照每 1ml TRIZOL加 0.5ml 異丙醇的量加入異丙醇,在室溫下(15℃~30℃)放置 10 分鐘,12000g(2℃~8℃)離心 10 分鐘 ;


                  5.棄上清 ,按照每 1ml TRIZOL 加 1ml 75%乙醇進 行洗滌,渦 旋混合,7500g(2℃~8℃)離心 5 分鐘,棄上清;


                  6. 讓沉淀的 RNA 在室溫下自然干燥;


                  7.用 Rnase-free water 溶解 RNA 沉淀。



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