MicroRNA(miRNA)是小的非編碼RNA分子,可通過沉默靶mRNA從而來調節基因翻譯。 它們實際上參與了所有生物過程。大量研究表明,miRNA是許多人類病理學中有潛力的診斷和預后生物標志物。最近,艾美捷代理品牌BioVendor推出了一種用于miRNA絕對定量的新方法-miRNA酶聯免疫分析(microRNA Enzyme Immunoassay,miREIA)。
miREIA檢測原理:將生物素標記的特異性DNA寡核苷酸與樣本中分離出的miRNA雜交。 然后將DNA / RNA雜交體轉移到固相上,固相涂有對完美匹配的RNA / DNA-生物素雜交體的特異單克隆抗體。然后將洗滌后的固相與鏈霉親和素-HRP偶聯物一起孵育,并通過發色底物?3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)進行顯色觀察,吸光度與血液樣本中存在的特定miRNA種類的濃度成比。
同時我們也測試了miREIA在各種生物樣品中的性能。我們使用miREIA試劑盒對從全血,HeLa細胞,外周血單核細胞,結直腸癌組織,關節滑液,唾液和尿液樣本中分離的miRNA進行定量,結果表明,我們的miREIA試劑盒可以很好的對上述所有樣本中的miRNA進行定量,檢測結果如下:
全血樣本中miRNA的分離及定量:將全血收集到PAXgene血液RNA收集管中。 使用RNA分離試劑盒(RIK001)分離RNA,該試劑盒旨在從培養的細胞,人/動物組織,植物組織和全血中分離RNA。 通過miREIA試劑盒測量了十二種不同miRNA的絕對濃度。 |
Hela細胞樣本中miRNA的分離及定量: 使用 RNA分離試劑盒(RIK001)從HeLa細胞中分離RNA。8種不同miRNA的絕對濃度由miREIA試劑盒測定. |
PBMC細胞樣本中的miRNA定量:采用His-topaque密度梯度離心法從全血中分離外周血單核細胞(PBMC)。使用RNA分離試劑盒(RIK001)分離RNA。7種不同mirna的絕對濃度由miREIA試劑盒測定. |
直腸癌組織樣本中miRNA提取及定量:切除獲得的結直腸癌(CRC)組織被穩定并儲存在RNAlater溶液中。使用RNA分離試劑盒(RIK001)分離RNA。8種不同mirna的絕對濃度由miREIA試劑盒測定. |
關節滑液樣本中miRNA的分離及定量: 使用血漿/血清RNA分離試劑盒(RIK002)從滑液中分離RNA。 通過miREIA試劑盒測量了五個不同miRNA的絕對濃度. |
唾液樣本中miRNA的分離及定量: 使用血漿/血清RNA分離試劑盒(RIK002)從唾液中分離RNA。 通過BioVendor miREIA試劑盒測量了兩種不同的miRNA的絕對濃度. |
尿液樣本中miRNA的分離及定量: 使用血漿/血清 RNA分離試劑盒(RIK002)從尿液中分離RNA。通過miREIA試劑盒測量了兩種不同miRNA的絕對濃度。 |
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