蛋白顯色的階段非常重要,可以知道蛋白遷移的是否均勻、平坦。如果分離后的蛋白需要轉膜,就用銅染,因為考馬斯藍染色是不可逆的。 考馬斯藍染色只用來檢測轉移的有效性,或者蛋白不需要轉膜時,只用于觀測蛋白 SDS-PAGE 分離的結果。
電泳可以是單相的(即一維分離)也可以是雙相的。單相電泳常用來進行蛋白和核酸的分離,蛋白的雙相電泳用于指紋-識別(即總蛋白成分分析)和細胞里所有蛋白的精確定位。這里我們所描述的是單相電泳技術。
準備凝膠電泳的樣品,需要對細胞和組織進行裂解以釋放目的蛋白,這些可溶性蛋白能夠穿過分離膠單獨移動。裂解緩沖液有很多種,但用 來做 WB試驗的僅有少數幾種。簡單來說,它們溶解蛋白的能力不同,含有十二烷基硫酸鈉和其他離子型去污劑的溶解能力最強。
由于其獨特的電子構型,熒光物具有典型的吸收(激發)和發射光譜。
單一染色在特定波長被激發,在另外一個波長發射光子。
復合染色由距離非常近的、能量可以在彼此之間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染色在受體分子的激發波長
被激發,在 供體分子的發射波長發射一個光子
Abcam 網站有一個搜索功能。在搜索框中輸入蛋白或其它靶物質的名稱,就會出現一個列表,可以通過產品類型、目的、實際用途、特異反應性、宿主種類、克隆性和結合情況進行篩選。
對于血清、腹水和組織培養上清的澄清,離心和過濾是基本的實驗室技術。這些技術可以去除會阻塞層析柱的脂類和小顆粒
物質。對于某些 樣品,緩沖液置換和除鹽也是必要的步驟。硫酸銨沉淀作為更進一步的預處理步驟,經常用于濃縮腹水中的免疫
球蛋白。
抗體,也叫免疫球蛋白 (Ig),是一種能特異性結合抗原的糖蛋白,而抗原是在易感染動物體內引發抗體產生的物質。在體內,抗體是由于外源性分子的侵襲而產生的??贵w以一個或者多個 Y
ELISA 樣品制備方案旨在作為教育資源用于制備 ELISA 測定法中用到的常規試樣。根據靶標和需要檢測內容的不同,樣品的制備過程可以進行優化。當構建新的測定法時,查閱相關文獻獲得與您實驗類似的實驗實例通常是較好的做法。
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