SYSY-標記質膜mCLING熒光探針產品

真核細胞依賴于多種途徑的膜循環，比如溶質分泌、營養吸收或膜蛋白周轉。每個途徑都使用幾種類型的細胞器，從質膜、內質網和高爾基體到回收中間體，如載體或運輸囊泡。如何確定在給定途徑中起作用的不同細胞器和回收中間體的類別是一項復雜的任務。并且不同細胞器的循環膜和蛋白質標記物也需要同時識別。

為了解決上述問題，通常的做法是采用熒光團標記回收細胞器的膜并使用免疫染色技術來揭示同一細胞器上的蛋白質標記。但是由于探針容易從它們的目標細胞器中丟失，甚至可能被困在其他結構中，例如線粒體。同時，由于大量的轉運細胞器彼此非常接近，這使得傳統的衍射顯微鏡難以區分它們。

為了克服這些限制，一種新型膜探針被開發出來，稱為膜結合熒光團-半胱氨酸-賴氨酸-棕櫚?；鶊Fmembrane-binding fluorophore-cysteine-lysine-palmitoyl group (mCLING)，這種新型mCLING探針，由一個八肽組成，包括一個半胱氨酸和七個賴氨酸，其中一個與棕櫚酰尾相連，它的分子量為 2,056D，包括 Atto647N部分。馬來酰亞胺基團將半胱氨酸橋接到熒光團。

mCLING探針能標記質膜并在內吞過程中被吸收。它在固定和透化后仍然附著在膜上，因此可以與免疫染色和超分辨率顯微鏡結合使用。 mCLING已經得到驗證的應用包括哺乳動物培養的細胞、酵母、細菌、原代培養的神經元、黑腹果蠅幼蟲神經肌肉接頭和哺乳動物組織。mCLING使我們能夠研究不同運輸細胞器的分子組成。

mCLING的標記模式與活細胞中 FM染料的標記模式相同，證實該探針確實報告了內吞作用。此外，mCLING對細胞沒有毒性作用。

在 mCLING存在下，我們將這些配體應用于培養中的COS7細胞。實時熒光成像顯示幾乎所有含有配體的細胞器均被 mCLING 標記。重要的是，mCLING的存在不會干擾COS7細胞中的膜運輸。例如，轉鐵蛋白攝取量不受mCLING的影響；它的回收和釋放也不受影響。

如圖，mCLING揭示了海馬神經元中主動循環和自發循環突觸小泡之間蛋白質組成的差異。

IHC 細胞器的多色免疫染色分析

mCLING探針技術，可用于標記質膜并跟蹤內吞細胞器。與大多數用于膜標記的市售染料不同，mCLING可以輕松地與固定和免疫染色結合用于細胞培養和組織中。此外，據我們所知，mCLING是唯一可用于揭示微小內吞細胞器形態和身份的熒光探針。此外，超高分辨率顯像也是mCLING探針一大優勢。

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